簡要描述：SCALEVIEW系列是用于ScaleS法的試劑。ScaleS法是一項(xiàng)由國立研究開發(fā)法人理化學(xué)研究所的宮脇敦史老師等人開發(fā)的，使用以尿素為主要成分的試劑溶液的透明化技術(shù)。SCALEVIEW不僅可以透明化含熒光蛋白的活體樣品，還可以有效地利用抗體或熒光染料標(biāo)記厚標(biāo)本，作為腦組織、球體和類器官的分析工具備受期待。
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| 品牌 | 其他品牌 | 供貨周期 | 一個(gè)月 |
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革新腦科學(xué)研究的光學(xué)方法
SCALEVIEW系列
SCALEVIEW系列是用于ScaleS法的試劑。ScaleS法是一項(xiàng)由國立研究開發(fā)法人理化學(xué)研究所的宮脇敦史老師等人開發(fā)的，使用以尿素為主要成分的試劑溶液的透明化技術(shù)。SCALEVIEW不僅可以透明化含熒光蛋白的活體樣品，還可以有效地利用抗體或熒光染料標(biāo)記厚標(biāo)本，作為腦組織、球體和類器官的分析工具備受期待。
◆Scale法是什么？
傳統(tǒng)透明化技術(shù)中常使用有機(jī)溶劑，但在發(fā)光過程中，需要水分子的熒光蛋白在此條件下會明顯褪色。
針對該問題，研究人員開發(fā)了使用水溶液的透明化技術(shù)——Scale法（ScaleA2法和ScaleS法的總稱）1-2）。
Scale法使用尿素、表面活性劑、甘油（ScaleA2法）或shan梨醇（ScaleS法）的混合溶液來抑制光散射，從而實(shí)現(xiàn)組織透明化的同時(shí)熒光蛋白不褪色。此外，脫脂所需的表面活性劑含量少，透明化后也可保持良好的超微結(jié)構(gòu)。
初次嘗試組織透明化的用戶，推薦使用這種能較好平衡透明度和結(jié)構(gòu)保持的Scale法。
圖1. PI染色的YER-H line小鼠大腦半球切片
數(shù)據(jù)提供：日本國立研究開發(fā)法人理化學(xué)研究所 腦神經(jīng)科學(xué)研究中心細(xì)胞機(jī)能探索技術(shù)研究小組/光量子工學(xué)研究中心生命光學(xué)技術(shù)研究小組 濱裕老師、星田哲志老師、宮脇敦史老師（贊助：奧林巴斯株式會社）
特點(diǎn)
● 操作簡便（僅需將組織依次浸入溶液）
● 約1日即可完成2 mm腦組織塊的透明化
● 透明化后可用于熒光染料染色（ChemScale）和免疫組織染色（AbScale或AbScale-G）
適用樣品
小鼠腦、人死后腦、骨骼（需脫鈣處理）、類器官/球體等
◆選擇指南
應(yīng)用 | 熒光蛋白 | 熒光染料 | 標(biāo)記抗體（免疫染色） | ||
方法 | ScaleS | ChemScale | AbScale | AbScale-G | |
所需試劑 | SCALEVIEW-S Trial Kit | ? | |||
SCALEVIEW-A2 | ? | ? | ? | ||
SCALEVIEW-S0 | ? | ? | ? | ||
SCALEVIEW-S4 | ? | ? | ? | ||
deScale solution | ? | ? | ? | ? | |
AbScale-G Solution Kit | ? | ||||
所需時(shí)間 | 約1天 | 約4~7天 | 約4~7天 | 約4~7天 | |
備注 | • 可與熒光蛋白共染色 | • 可與熒光蛋白共染色 | • 可與熒光蛋白共染色 | ||
各試劑的說明
▼ SCALEVIEW-S Trial Kit
本試劑盒包含6種類型的溶液：SCALEVIEW-S0、SCALEVIEW-S1、SCALEVIEW-S2、SCALEVIEW-S3、SCALEVIEW-S4、SCALEVIEW-SMt。通過將組織浸入各溶液中，即可快速簡便地實(shí)現(xiàn)透明化，并對折射率進(jìn)行調(diào)整。
▼ SCALEVIEW-A2
基于2011年報(bào)告的透明化方法Scale的透明化溶液。折射率（20℃）較低，設(shè)定為RI = 1.377-1.381，無需高昂的顯微鏡設(shè)備也可輕松匹配折射率，推薦初次嘗試透明化的用戶使用。
▼ deScale solution
ScaleS法的清洗步驟中使用的試劑。
簡單透明化球體
僅使用SCALEVIEW-S4透明化球體的protocol3）和實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)可參考SCALEVIEW-S4的產(chǎn)品頁面。
其他所需的儀器、器材和試劑
▼儀器、器材
● 熒光顯微鏡
● ※ 請根據(jù)折射率（SCALEVIEW-A2: RI=1.38, SCALEVIEW-S4: RI=1.47, SCALEVIEW-SMt: RI=1.49）選擇合適的物鏡。
● 建議在獲取數(shù)據(jù)之前與您使用的顯微鏡廠家進(jìn)行聯(lián)系。
● 錐形管（請根據(jù)樣品，選擇5 mL/15 mL/30 mL/50 mL）
● 塑料培養(yǎng)皿（請根據(jù)樣品，選擇直徑35 mm、直徑60 mm或直徑100 mm）
● 搖床
▼試劑
● 多聚甲醛（產(chǎn)品編號：160-16061）
● 1 × PBS (產(chǎn)品編號：164-25511)
● 瓊脂糖
◆數(shù)據(jù)
腦組織
ScaleS：小鼠腦切片及腦半球的透明化
▼Protocol
灌注固定+后固定 | 透明化 | 清洗 | 透明化 | 觀察 | |||||
4%PFA/PBS(-) | PBS(-) | SCALEVIEW-S0 | SCALEVIEW-S1 | SCALEVIEW-S2 | SCALEVIEW-S3 | deScale Solution | SCALEVIEW-S4 | SCALEVIEW-SMt | SCALEVIEW-SMt |
4°C | RT | 37°C | 37°C | 37°C | 37°C | 4°C | 37°C | 37°C | RT |
各溶液的使用量（以小鼠腦半球1~2 mm的厚切片為例*）
【透明化】SCALEVIEW-S0/S1/S2/S3：各5 mL / deScale Solution 5 mL
【觀 察】SCALEVIEW-SMt：5 mL
*試劑的使用量和處理時(shí)間因樣品尺寸而異。
ScaleS：YFP-H系統(tǒng)小鼠全腦透明化
| 物種：小鼠 (Thy1-YFP-H line, 20W, ♂) 組織：全腦 顯微鏡：多光子激光掃描顯微鏡 (Evident，F(xiàn)VMPE-RS) 物鏡：XLPLN10XSVMP (NA 0.6) 激光：960 nm （YFP） 圖像尺寸：512 x 512, 170 tiles, Z=8,000 μm, Z Step 16 μm |
ScaleS：透明化小鼠腦切片并使用熒光標(biāo)記的凝集素觀察血管
| 物種：小鼠（C57BL6/J、10.5日齡) 組織：大腦冠狀切面 (1.2 mm厚) 顯微鏡：共聚焦激光掃描顯微鏡（正置式） 凝集素：Texas Red標(biāo)記 番茄凝集素 |
ScaleA2：YFP-H系統(tǒng)小鼠全腦透明化
物種：小鼠 組織：全腦 物鏡：XLSLPLN25XSVMP (NA 0.90, WD 8 mm) |
ScaleA2：YFP-H系統(tǒng)小鼠海馬透明化
物種：小鼠 組織：海馬體 物鏡：XLPLN25XSVMP (NA1.0, WD 4 mm) |
ChemScale：YFP-H系統(tǒng)小鼠腦半球切片的Propidium iodide (PI) 染色和透明化
| 物種：小鼠（Thy1-YFP-H line, 42W, ♂) 組織：大腦（冠狀面切片, 2 mm厚） 顯微鏡：共聚焦激光掃描顯微鏡（Evident，F(xiàn)V3000，倒置式） 物鏡：UPLSAPO10x2 (NA 0.40) 激光：488 nm (YFP) / 561 nm (PI) |
▼Protocol（詳細(xì)protocol）
灌注固定+后固定 | 前處理 | 熒光染料染色 | 透明化 | 觀察 | |||||||
4% PFA/PBS(-) | PBS(-) | SCALEVIEW-S0 | SCALEVIEW-A2 | 8M 尿素 | SCALEVIEW-A2 | deScale Solution | 蛍光染料* | SCALEVIEW-A2 | deScale Solution | SCALEVIEW-S4 | SCALEVIEW-S4 |
4°C | RT | 37°C | 37°C | 37°C | 37°C | 4°C | RT | RT | 4°C | 37°C | RT |
*熒光染料例：125 nM SYTO™61 (Thermo Fisher Scientific), 500 nM DAPI, 1 μM PI
各溶液的使用量（以小鼠腦半球1~2 mm的厚切片為例）
【前處理】SCALEVIEW-S0：10 ｍL / SCALEVIEW-A2：10 mLx2 / deScale Solution10 mL
【染 色】染色溶液：8 mL /deScale Solution：10 mL
【透明化】SCALEVIEW-S4：10 mL
【觀 察】SCALEVIEW-S4：10 mL
AbScale：阿爾茨海默病模型小鼠腦切片的免疫組織化學(xué)染色和透明化
| 物種：小鼠（阿爾茨海默病模型，17月齡) 組織：大腦切片（2 mm厚） 顯微鏡：共聚焦激光掃描顯微鏡（Evident，F(xiàn)V1200，倒置式） 物鏡：XLPLN10XSVMP (NA 0.60) |
▼Protocol
灌注固定+后固定 | 前處理 | 免疫染色 | 透明化 | 觀察 | |||||||||
4% PFA/PBS(-) | PBS(-) | SCALEVIEW-S0 | SCALEVIEW-A2 | 8M尿素 | SCALEVIEW-A2 | deScale Solution | 1% 封閉劑*/PBS(-) | 抗體/AbScale Solution** | AbScale Solution** | 4% PFA/PBS(-) | deScale Solution | SCALEVIEW-S4 | SCALEVIEW-S4 |
4°C | RT | 37°C | 37°C | 37°C | 37°C | 4°C | RT | 37°C | RT | 4°C | 4°C | 37°C | RT |
* 推薦試劑：Roche公司 產(chǎn)品編號：11096176001
** AbScale溶液：含0.33 M尿素和0.1％（wt/vol）Triton X-100的PBS(-)溶液（自行配制）
各溶液的使用量（以小鼠腦半球1~2 mm的厚切片為例）
【前處理】SCALEVIEW-S0：10 ｍL / SCALEVIEW-A2：10 mL×2 / deScale Solution：10 mL
【染 色】AbScale Solution：1.5 mL /deScale Solution：10 mL
【透明化】SCALEVIEW-S4：10 mL
【觀 察】SCALEVIEW-S4：10 mL
AbScale-G：阿爾茨海默病模型小鼠腦切片的免疫組織化學(xué)染色和透明化
| 物種：小鼠（阿爾茨海默病模型，60周齡) 組織：大腦切片（1 mm厚） 顯微鏡：共聚焦激光掃描顯微鏡（Evident，F(xiàn)V1200，倒置式） 物鏡：XLPLN10XSVMP (NA 0.60)
<數(shù)據(jù)提供>日本國立理化學(xué)研究所腦科學(xué)中心 細(xì)胞功能發(fā)現(xiàn)技術(shù)研究團(tuán)隊(duì) 濱老師 |
AbScale-G改善了傳統(tǒng)方法中難以染色的Cy3等熒光染料的滲透性，可以與多種熒光染料和抗體一起使用。
▼Protocol
灌注固定+后固定 | 前處理 | 免疫染色 | 透明化 | 觀察 | |||||||
4% PFA/PBS(-) | PBS(-) | SCALEVIEW-S0 | SCALEVIEW-A2 | 8M尿素 | SCALEVIEW-A2 | deScale Solution | 抗體 /AbScale-G Solution | AbScale-O Solution* | 4% PFA /PBS(-) | SCALEVIEW-S4 | SCALEVIEW-S4 |
4°C | RT | 37°C | 37°C | 37°C | 37°C | RT | 37°C | RT | RT | 37°C | RT |
* AbScale-O 溶液：含0.33 M尿素和0.1% (wt/vol) Triton X-100的PBS(-)溶液（自行配制）
各溶液的使用量（以小鼠腦半球1 mm的厚切片為例）
【 前 處 理】SCALEVIEW-S0: 6 ｍL / SCALEVIEW-A2: 6 mLx2 / deScale Solution: 10 mL
【免疫染色】AbScale-G Solution: 1.5 mL /deScale Solution: 10 mL
【透 明 化 】SCALEVIEW-S4：8 mL
【觀 察】SCALEVIEW-S4：8 mL
球體和類器官
AbScale：大鼠海馬神經(jīng)干細(xì)胞來源神經(jīng)球的免疫染色和透明化
| 物種：成年大鼠海馬神經(jīng)干細(xì)胞來源神經(jīng)球 顯微鏡：共聚焦激光掃描顯微鏡（Evident，F(xiàn)V1000） 物鏡：UMPLFLN10XW (NA 0.3) |
▼Protocol
灌注固定+后固定 | 前處理 | 免疫染色 | 透明化 | 觀察 | |||||||||
4% PFA | PBS(-) | SCALEVIEW-S0 | SCALEVIEW-A2 | 8M 尿素 | SCALEVIEW-A2 | deScale Solution | 1% 封閉劑* /PBS(-) | 抗體 /AbScale Solution** | AbScale Solution** | 4% PFA /PBS(-) | deScale Solution | SCALEVIEW-S4 | SCALEVIEW-S4 |
4°C | RT | 37°C | 37°C | 37°C | 37°C | 4°C | RT | 37°C | RT | 4°C | 4°C | 37°C | RT |
* 推薦試劑：Roche公司 產(chǎn)品編號：11096176001
** AbScale溶液：含0.33 M尿素和0.1％（wt/vol）Triton X-100的PBS(-)溶液（自行配制）
各溶液的使用量
【 前 處 理】SCALEVIEW-S0：1.2 ｍL / SCALEVIEW-A2：1.2 mL / deScale Solution：1.2 mL
【免疫染色】以AbScale的Protocol為準(zhǔn)
【 透 明 化】SCALEVIEW-S4：1.2 mL
【觀 察】SCALEVIEW-S4：1.2 mL
AbScale：人iPS細(xì)胞來源肝細(xì)胞（iCell® Hepatocytes2.0）的免疫染色和透明化
明亮視野 |
FITC |
明亮視野+ FITC | 樣品：iCell® Hepatocytes2.0 球體形成板：Prime Surface® 96孔板 一抗：抗ABCB11抗體 二抗：抗兔IgG(H+L)，山羊，F(xiàn)ITC標(biāo)記 |
▼Protocol
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| ? |
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| iCell® Hepatocytes2.0在平板培養(yǎng)中成熟化 | 使用球體形成板制備球體 | 使用SCALEVIEW透明化 |
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| 產(chǎn)品編號 | 產(chǎn)品名稱 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 產(chǎn)品等級 | 備注 |
| 299-79901 | SCALEVIEW-S Trial Kit SCALEVIEW-S試劑盒小包裝 | 1 Kit | 組織透明化用 | |
| 193-18455 | SCALEVIEW-A2 SCALEVIEW® 組織透明化試劑A2 | 500 mL | 組織透明化用 | |
| 196-18521 | SCALEVIEW-S0 SCALEVIEW® 組織透明化試劑S0 | 250 mL | 組織透明化用 | |
| 194-18561 | SCALEVIEW-S4 SCALEVIEW-S4組織透明化試劑 | 250 mL | 組織透明化試劑 | |
| 041-34425 | deScale Solution 透明化洗滌溶液 | 500 mL | 組織透明化試劑 | |
| 293-97001 | AbScale-G Solution Kit | 1 Kit | 組織透明化試劑 |
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